3 ~ 5 molekula biotin és 1 molekula fehérjekötő kísérlet

2022-01-04

Először is a kísérlet lépése:
1. Oldjunk fel 2-10 mg fehérjét 1 ml BUPHTM foszfátpufferben, és számítsuk ki az oldott millimorátort. Ha a fehérje nem megfelelő puffereket (például TRIS-t vagy glicint) tartalmaz, akkor dialízissel vagy PBS-ben történő koncentrálással eltávolítható. Számítsa ki: Fehérje tömege (Mg) / fehérje molekulatömege (Mw) = a fehérjék mólszáma.
2. Felbontás előtt egyensúlyozza ki a biotint szobahőmérsékletre. Adjunk hozzá 2 mg szulfo-nhs-biotint 100 ul ultratiszta vízben, adjunk hozzá megfelelő mennyiségű biotint, általában 10 mg/ml fehérje esetén a molekulák 12-szeresét, 2 mg/ml fehérjeoldat esetén több mint 20-szorosát, vagy a reagenst. por formájában is adható a fehérjeoldathoz.
3. 30 perc szobahőmérsékleten vagy 2 óra jégen.
4. Mossa elő a tisztított oszlopot 30 ml PBS-sel, a gyűjtött mennyiséggel megegyező pufferrel, és 0,5 ml vagy 1 ml külön csőből gyűjtsön össze.
5. A fehérjetartalmat 280 nm-es abszorpciós értékeken határoztuk meg.

6. A biotinilezett fehérjéket 4 °C-on tároljuk felhasználásig, és nátrium-nátriumot, glicerint vagy hasonlókat adhatunk hozzá.

Ha beszállítót vagy gyártót keres a 7-bróm-1,1,1-trifluorheptán-2-onhoz (CAS-szám:647831-24-1) vegye fel velünk a kapcsolatot.